世博游览12号从十六铺码头出发，沿途经过南浦大桥和黄浦大桥，穿越世博园内的五个片区，全程大约25分钟。远远地，就看见位于浦东园区的中国馆、世博文化中心，日本馆、英国馆等造型特别的展馆也依次映入眼帘，位于浦西园区的城市未来馆、中国船舶馆、石油馆等在对岸遥相呼应。游览船最后停靠在非洲联合馆附近的M3水门码头。